· 样本要求
奥米科专注于代谢组学分析服务,可承接各领域的代谢组学检测分析项目,包括氨基酸代谢组学、脂质组学、靶标代谢组学、药物代谢组学、微生物代谢组学、植物代谢组学、医学代谢组学等;可检测分析多种样本类型,包括哺乳类动物的血液、尿液、粪便、组织、脑脊液、脊髓液及其他体液,植物的根、茎、叶、果实及培养体细胞,微生物的菌体及培养液,自然环境的水体及淤泥,中药天然产物等。对于常处理的血液、尿液、组织等样本的详细要求如下。
【血液样本】
·样本量要求
GC-MS平台 200ul/样
LC-MS平台 200ul/样
·样本收集
1.采集血样,静置30分钟,血液凝固;
2.取液体部分进行离心分离,4摄氏度,3000转每分钟(rpm),5分钟;
3.离心后取上层清液(一般为淡黄色),每个样本至少需取500微升生物量,准确记录并进行编号。此过程中要求每个生物学重复样本所用的时间一致,而且血样在室温放置不超过3个小时,4摄氏度保存不应超过24小时,以防止血液中的代谢物发生变化。
4.冰冻样本,将血清样本至于-80度冰箱冰冻保存。
·注意事项
1.采血过程中注意消毒,防止微生物污染;
2.离心速率建议不宜过快,以免血细胞破碎;
3.准确记录每个样本收集的血清样本体积;
4.血清样本冰冻后避免反复冻融;
5.在运输样本过程提供冰盒干冰保证低温(环境);
6.如果制备血浆样本,GC-MS、LC-MS平台宜用EDTA抗凝;如果计划做多平台检测分析,建议各平台都制备血清为宜,且需要提前分装保存,用于GC-MS、LC-MS样本不应添加任何微生物抑制剂。
【临床尿液样本】
·样本量要求
GC-MS平台 200ul/样
LC-MS平台 200ul/样
·样本收集
1.对尿液样本进行编号以及做好临床样本的采样信息记录;
2.取尿液大于1mL,在4摄氏度保存,静置;
3.取1mL尿液进行离心分离,4摄氏度, 10000rpm, 5分钟;离心后取500微升上层清液,并加入微生物抑制剂(建议加叠氮化钠溶液20微升(0.0025mol/L));GC-MS、LC-MS平台不添加任何微生物抑制剂;
4.冰冻样本,迅速将尿液样本置于-80度冰箱冰冻保存,直到实验。
·注意事项
1.尿液样本不能及时进行离心处理,务必放入到4摄氏度的冰箱中静置保存,但不宜超过24小时;
2.尿液样本在进行前处理时保证每个生物学重复样本所有的时间一致;
3.注意样本冰冻后避免反复冻融,如果需要做其他生化检测应提前分装保存;
4.临床样本需要记录的采样信息:
性别;BMI;年龄;种族;饮食结构;过往病史;是否有其他疾病干扰;采样时间;采样方式;采样地;采样量。
【粪便样本】
·样本收集
1.取得粪便样本后迅速放入液氮速冻;
2.迅速转入-80℃冰箱保存,期间不得反复冻融;
3.全程干冰运送。
·注意事项
1.粪便样本在肠道里形成时间和区段不一样,含有微生物的量以及形成的成分不一致,因此所选择样本的节段不同,最终测到的代谢物也会因为个体的差异性而比较大;
2.若不能确定是否选择同一节段的粪便样本,建议先取大量样本如8-10克鲜样,并将样本混匀后进行后续实验,避免带来的个体差异太大;
3.新鲜的样本因为含水量的差异,称量样本的质量会受到影响,建议先冻干粪便样本,再继续后续实验。
【组织样本】
·样本量要求
GC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
LC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
·样本收集
1.取得组织样本后迅速放入液氮速冻;
2.在液氮条件下将冻好的组织样本研磨成粉;
3.尽可能将样本研磨细腻和均匀;
4.液氮研磨过程中液氮不宜过少,防止样本研磨过程中融化;
5.液氮研磨成粉后,样本应在-80℃保存5h以上或过夜存储,然后再于真空冷冻干燥机中抽为冻干粉状态;
6.每个生物学重复需要提供至少50 mg/个的干粉生物量;
7.运输过程仅需要普通冰盒运输即可。
·注意事项
如果样本还需要做其他检测,应提前分装保存,不应反复冻融。
【细胞样本】
·样本量要求
GC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
LC-MS平台 20mg冻干粉/样=200mg鲜重/样
·样本收集
1.每个生物学重复取相同的一体积细胞悬浊液(至少保证1Volume = N×10e^7 cells, N>1。为得到最佳谱图质量以得到最好的分析结果,强烈建议每个生物学重复的冻干粉量在不计算管壁粘附的情况下,至少达到50 mg以上),离心收集后用生理盐水清洗3-5次,以去除胞外物质;
2.将清洗好的样本装入离心管中(盖上管盖),直接放入液氮罐中淬灭细胞(无需研磨,此项过程的目的是灭活);
3.将淬灭过的细胞样本放入-80℃冷冻,然后使用冷冻干燥机进行干燥,最终得到冻干粉末。
·注意事项
1.细胞样本量的含盐量保证低于0.9%;
2.细胞样本中不含金属如Fe、Mn、Ni等;
3.样本在清洗过程中尽量保证细胞不被破坏。
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