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·  样本要求

奥米科专注于代谢组学分析服务,可承接各领域的代谢组学检测分析项目,包括氨基酸代谢组学、脂质组学、靶标代谢组学、药物代谢组学、微生物代谢组学、植物代谢组学、医学代谢组学等;可检测分析多种样本类型,包括哺乳类动物的血液、尿液、粪便、组织、脑脊液、脊髓液及其他体液,植物的根、茎、叶、果实及培养体细胞,微生物的菌体及培养液,自然环境的水体及淤泥,中药天然产物等。对于常处理的血液、尿液、组织等样本的详细要求如下。

 

【血液样本】

·样本量要求

GC-MS平台 200ul/

LC-MS平台 200ul/

·样本收集

1.采集血样,静置30分钟,血液凝固;

2.取液体部分进行离心分离,4摄氏度,3000转每分钟(rpm),5分钟;

3.离心后取上层清液(一般为淡黄色),每个样本至少需取500微升生物量,准确记录并进行编号。此过程中要求每个生物学重复样本所用的时间一致,而且血样在室温放置不超过3个小时,4摄氏度保存不应超过24小时,以防止血液中的代谢物发生变化。

4.冰冻样本,将血清样本至于-80度冰箱冰冻保存。

·注意事项

1.采血过程中注意消毒,防止微生物污染;

2.离心速率建议不宜过快,以免血细胞破碎;

3.准确记录每个样本收集的血清样本体积;

4.血清样本冰冻后避免反复冻融;

5.在运输样本过程提供冰盒干冰保证低温(环境);

6.如果制备血浆样本,GC-MSLC-MS平台宜用EDTA抗凝;如果计划做多平台检测分析,建议各平台都制备血清为宜,且需要提前分装保存,用于GC-MSLC-MS样本不应添加任何微生物抑制剂。

 

【临床尿液样本】

·样本量要求

GC-MS平台 200ul/

LC-MS平台 200ul/

·样本收集

1.对尿液样本进行编号以及做好临床样本的采样信息记录;

2.取尿液大于1mL,在4摄氏度保存,静置;

3.1mL尿液进行离心分离,4摄氏度, 10000rpm 5分钟;离心后取500微升上层清液,并加入微生物抑制剂(建议加叠氮化钠溶液20微升(0.0025mol/L));GC-MSLC-MS平台不添加任何微生物抑制剂;

4.冰冻样本,迅速将尿液样本置于-80度冰箱冰冻保存,直到实验。

·注意事项

1.尿液样本不能及时进行离心处理,务必放入到4摄氏度的冰箱中静置保存,但不宜超过24小时;

2.尿液样本在进行前处理时保证每个生物学重复样本所有的时间一致;

3.注意样本冰冻后避免反复冻融,如果需要做其他生化检测应提前分装保存;

4.临床样本需要记录的采样信息:

性别;BMI;年龄;种族;饮食结构;过往病史;是否有其他疾病干扰;采样时间;采样方式;采样地;采样量。

 

【粪便样本】

·样本收集

1.取得粪便样本后迅速放入液氮速冻;

2.迅速转入-80℃冰箱保存,期间不得反复冻融;

3.全程干冰运送。

·注意事项

1.粪便样本在肠道里形成时间和区段不一样,含有微生物的量以及形成的成分不一致,因此所选择样本的节段不同,最终测到的代谢物也会因为个体的差异性而比较大;

2.若不能确定是否选择同一节段的粪便样本,建议先取大量样本如8-10克鲜样,并将样本混匀后进行后续实验,避免带来的个体差异太大;

3.新鲜的样本因为含水量的差异,称量样本的质量会受到影响,建议先冻干粪便样本,再继续后续实验。

 

【组织样本】

·样本量要求

GC-MS平台 20mg冻干粉/=200mg鲜重/

LC-MS平台 20mg冻干粉/=200mg鲜重/

·样本收集

1.取得组织样本后迅速放入液氮速冻;

2.在液氮条件下将冻好的组织样本研磨成粉;

3.尽可能将样本研磨细腻和均匀;

4.液氮研磨过程中液氮不宜过少,防止样本研磨过程中融化;

5.液氮研磨成粉后,样本应在-80℃保存5h以上或过夜存储,然后再于真空冷冻干燥机中抽为冻干粉状态;

6.每个生物学重复需要提供至少50 mg/个的干粉生物量;

7.运输过程仅需要普通冰盒运输即可。

·注意事项

如果样本还需要做其他检测,应提前分装保存,不应反复冻融。

 

【细胞样本】

·样本量要求

GC-MS平台 20mg冻干粉/=200mg鲜重/

LC-MS平台 20mg冻干粉/=200mg鲜重/

·样本收集

1.每个生物学重复取相同的一体积细胞悬浊液(至少保证1Volume = N×10e^7 cells, N>1。为得到最佳谱图质量以得到最好的分析结果,强烈建议每个生物学重复的冻干粉量在不计算管壁粘附的情况下,至少达到50 mg以上),离心收集后用生理盐水清洗3-5次,以去除胞外物质;

2.将清洗好的样本装入离心管中(盖上管盖),直接放入液氮罐中淬灭细胞(无需研磨,此项过程的目的是灭活);

3.将淬灭过的细胞样本放入-80℃冷冻,然后使用冷冻干燥机进行干燥,最终得到冻干粉末。

·注意事项

1.细胞样本量的含盐量保证低于0.9%

2.细胞样本中不含金属如FeMnNi等;

3.样本在清洗过程中尽量保证细胞不被破坏。

 

   
     

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